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调制叶绿素荧光仪的技术研究
发表时间:2018-05-17 13:43:25点击:2327
叶绿素荧光技术是光合作用测量的方法之一,因为其强大的功能广泛应用于藻类生理生态研究领域中。由于常温常压下叶绿素荧光主要来源于光系统II的叶绿素a,而光系统II处于整个光合作用过程的较上游,因此包括光反应和暗反应在内的多数光合过程的变化都会反馈给光系统II,进而引起叶绿素a荧光的变化,也就是说几乎所有光合作用过程的变化都可通过叶绿素荧光反映出来。与其它测量方法相比,叶绿素荧光技术还具有不需破碎细胞、简便、快捷、可靠等特性,因此在上得到了广泛的应用。
技术研究
调制叶绿素荧光仪离不开光调制技术,有了它才能使得我们在有环境光的情况下测量叶绿素荧光;其次就是饱和脉冲技术,提供一个瞬间的强光脉冲,来暂时打断光系统II电子传递过程。光合机构吸收的光能有三条去激途径:光化学反应p、叶绿素荧光f和热耗散d。根据能量守恒原理,假设吸收的光能为常数1,得到1=P+F+D。叶绿素荧光产量可以测量出来,而我们希望得出P和D两个参数。根据基本的数学原理,一个等式有两个未知数是无解的。此时如果给出一个饱和脉冲,暂时打断光化学反应过程,则P=0这个等式就可以求解了。由此可知,饱和脉冲技术的基本作用就是打断光合作用,用于求出光化学反应和热耗散分别用去了多少能量。理想的荧光仪必须能在不改变样品状态的情况下即非破坏性进行生理活性测量,需要满足如下几条要求:
1、测量光必须足够低,只激发色素的本底荧光而不引起光合作用,这样才能获得暗适应后的较小荧光Fo。
2、测量光由一系列微秒级的光脉冲组成,这些短光脉冲可以不同的频率给出。在很低的频率下,即使单个微秒级光脉冲的强度比较高,也不会引起光合作用。
3、用反应迅速、线性范围大的光电二较管或光电倍增管来检测这些由微秒级测量光脉冲激 发的微秒级荧光脉冲;荧光脉冲信号首先由交流耦合放大器放大,然后进一步经选择性锁相放大器处理,只放大和调制测量光同频率的荧光信号,可以有效屏蔽环境中本身就存在的与叶绿素荧光同波长的背景噪音。
4、当打开光化光或饱和脉冲时,可以自动提高测量光频率,以提高信号采点率,有效记录一些比较快速的荧光动力学变化。
研究运用
光系统II反应中心光化学效率的表征
光化学效率(FV’/Fm’)的变化,反映PSII反应中心活性的变化,植物正常情况下的 FV’/Fm’一般维持在0.80左右。FV’/Fm’降低,说明PSII反应中心受到损伤,可能是一下几种原因:
1、PSII 天线色素尺寸增大,导致光合效率降低。
2、PSII反应中心D1蛋白较新速率降低; 蛋白较新速率降低。
3、通过叶黄素循环形成玉米黄质的速率降低。
4、PSII水分解中心钝化失活。
PSII光合电子传递效率的表征
光化学淬灭:反映PSII天线色素分子天线色素分子吸收光能后,用于光化学电子传递的份额,因此也反映了天线色素分子吸收的光能用于光合电子传递的变化;同时,光化学淬灭也反映也反映PSII初级电子受体氧化还原状态的变化。要保持高的光化学淬灭,就要使PSII反应中反应心处于开放状态
类囊体膜能量状态和光合作用过程中热耗散的表征
非光化学猝灭:反映了由于内囊体膜内基质酸化而引起的内囊体膜能化的能量耗散,能量耗散主要发生在天线色素上。